BoGel TBE PAGE预制胶是一种使用安全、便捷、高品质的常规尺寸聚丙烯酰胺非变性预制凝胶,主要用于10~3000bp双链核酸或10~3000nt单链核酸的高分辨率电泳分析或纯化,广泛用于限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物分析等的实验。本预制胶有1.5厘米高的浓缩胶,具有非常优良的分离效果,电泳后DNA条带平整、清晰、细腻、锐利,几乎没有边缘效应;本预制胶胶板为玻璃材质,电泳效果非常好,达到甚至超过了自配TBE PAGE胶的电泳效果。
BoGel TBE PAGE预制胶由高纯度的Tris、硼酸、EDTA等试剂制备,缓冲能力强,适合长时间电泳,且分辨率高、分离效果佳。严格的质量控制可确保凝胶和缓冲液中无DNase和RNase。
- 本制品使用安全、便捷。本预制胶无需配制,即开即用,去掉梳子即可上样,而传统的TBE PAGE配制凝胶繁琐费时,并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。
- 本制品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板,和塑料胶板相比,大大减少了胶板对核酸的吸附,电泳效果更好。本制品流水线灌注,品质稳定可靠,重复性好,不同批次的产品一致性高。
- 本制品电泳效果好。本预制胶的核酸分离效果极佳,核酸条带平整、清晰、细腻、锐利。
- 本制品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽,如Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽(需与特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。
- 本制品电泳时间短。本预制胶推荐的电泳电压和电泳时间为150V 50~75分钟,即可完成电泳并获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间取决于凝胶浓度。
- 本制品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可,并且玻璃胶板打开极为方便,无需特殊的起撬工具。
核酸电泳通常是基于长度来电泳分离DNA或RNA片段的分析技术。将待分析的核酸样品置于凝胶中,核酸由于其糖磷酸主链带负电在电场的作用下向阳极迁移。不同大小的片段能够通过在凝胶中的迁移速度差异来完成分离,较长的分子迁移速度较慢,因为它们在凝胶中的阻力较大。由于分子的大小影响其迁移速度,在一定的时间内,较短的片段比较长的片段更接近阳极。在核酸电泳实验中,常用的有两种凝胶:琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。与琼脂糖凝胶相比,聚丙烯酰胺凝胶具有更高分辨率和灵敏度、低本底染色、所需样品量较少、高效印迹、易于从凝胶中提取DNA、不干扰酶反应以及准确性和可重复性高等优点。常用于核酸电泳的PAGE凝胶有TBE PAGE凝胶、TBE-Urea PAGE凝胶和EMSA PAGE凝胶等。其中,TBE PAGE凝胶由TBE缓冲液(Tris-硼酸-EDTA)制备,主要用于核酸的非变性电泳,常应用于DNA或RNA片段的高分辨率分析,包括限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物等的分析等实验。
Acr/Bis | 29:1 |
凝胶浓度 | 12% |
加样孔数 | 10孔 |
最大上样量 | 60μL |
胶板尺寸 | 98×84×4.1mm(宽×高×厚) |
凝胶尺寸 | 81×74×1.5mm(宽×高×厚) |
BoGel TBE PAGE预制胶提供不同浓度的梯度胶和固定浓度胶,并有10孔和15孔两种孔数选择。固定浓度胶包括5%、10%、12%和15%;梯度胶浓度为4~20%。每种预制胶的最佳分离范围请参考下表:
产品编号 | 预制胶浓度 | 孔数 | 最大上样量 | 电泳缓冲液 | 最佳分离范围 | 溴酚蓝前沿位置 |
YTC0071/YTC0072 | 5% | 10/15 | 60/30μL | 1×TBE | ~200bp~2kb | ~70±5bp |
YTC0074/YTC0075 | 10% | ~50bp~1.5kb | ~35±5bp | |||
YTC0077/YTC0078 | 12% | ~30bp~1.2kb | ~30±5bp | |||
YTC0082/YTC0083 | 15% | ~20bp~1kb | ~20±5bp | |||
YTC0085/YTC0086 | 4~20% | ~10bp~3kb | ~15±5bp |
注:需要检测的样品数量多或者需要定量时,推荐使用15孔预制胶,通量更大、更便于进行较多样品的定量统计分析;需要获得非常漂亮的代表性图片时,推荐使用10孔预制胶,10孔预制胶获得的条带更加平整和锐利。
组分 | 规格 |
PAGE预制胶(TBE,12%,10孔) | 10块 |
说明书 | 1份 |
保存:4℃,有效期1~2个月,切勿冷冻。
- 由于本预制胶保质期较短,需新鲜制备,在您确认订购后约5个工作日才能发货。
- 本预制胶不能置于0℃以下冷冻,否则凝胶会冻裂。
- 电泳液建议新鲜配制,试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
- 本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽,所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装,使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液,见下图。一般内槽电泳液加满,外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可,并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1~2次。另外,部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条,使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。
图1.Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于百奥莱博的BoGel PAGE预制胶的该部位是平的,使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽,所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图),使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液。 - 由于BoGel PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE Gel或Novex Mini Gel略薄,所以需加特制挡板配合使用。如有需要,请在订购本制品时告知。
- 样品准备:限制性酶切产物、PCR产物、引物等加入适量DNA上样缓冲液,推荐使用6×DNA上样缓冲液(货号:YT418)。
注:BoGel TBE PAGE预制胶分辨率非常高,DNA上样量需求显著低于琼脂糖凝胶,一般为琼脂糖凝胶的10%左右,建议每孔0.2μg左右的DNA量即可。但如果后续实验目的是为了切胶回收目的DNA,可以根据需要加大上样量。 - 预制胶、电泳液的准备:
- 上样:将10μL吸头的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样,吸头避免戳破凝胶,更不能使胶板变形导致样品泄漏。推荐使用DNA Ladder(100bp~10kb)(货号:YT020)。
注:最佳上样量须通过实验来确定,样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。 - 将电泳槽盖子盖好,并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红,黑对黑)。一般在150V电压,电泳50~75分钟左右即可,电泳至蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处或其它合适位置,停止电泳。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶的浓度和数量等因素有关系,需自行适当调整。
- 取出玻璃胶板,将刀片从玻璃胶板一侧轻轻划一下,稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板,用刮板将凝胶取出。
- 染色:将凝胶放至洁净容器内(例如适当大小的玻璃培养皿),加入适量的核酸染色液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30~50rpm)染色10~30分钟。用超纯水或TBE洗涤1~3次,每次3~5分钟,即可使用凝胶成像设备观察电泳后的染色结果。洗涤次数越多,时间越长,背景染色会越浅,但洗涤次数过多或时间过长,也会导致核酸条带的染色变弱。核酸染料推荐使用NadRed红色核酸染料(货号:YT015)。
- 电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳条带大幅扭曲、电泳时间大幅度延长:
可能原因是内槽缓冲液泄漏而导致。建议重新夹一下胶板,防止在电泳过程中内槽液面逐步降低。 - 使用自己配制的电泳缓冲液与上样缓冲液电泳后条带较模糊:
缓冲液配制不当,或长期放置变质,都会对本预制胶的电泳效果产生影响。推荐使用TBE缓冲液(货号:YTC0620)、TBE缓冲液(货号:YTC0623)以及TBE缓冲液(货号:YT422)。 - 在上样时不可将吸头过度插入上样孔中,吸头的过度插入会使胶板变形,导致样品泄漏。
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